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大鼠Elisa优乐国际娱乐登录样本处理及注意事项

点击次数:131 发布时间:2019-03-07

优乐国际娱乐登录大鼠钾离子通道2(PIC2)优乐国际娱乐登录(ELISA)

实验原理

优乐国际娱乐登录采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被大鼠钾离子通道2(PIC2)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠钾离子通道2(PIC2)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

 

样本处理及要求

1.  血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2.  血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
优乐国际娱乐登录3.  组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

优乐国际娱乐登录4.  细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

优乐国际娱乐登录注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

 

需要而未提供的试剂和器材

1. 酶标仪(450nm)

优乐国际娱乐登录2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

优乐国际娱乐登录4. 蒸馏水或去离子水

 

优乐国际娱乐登录优乐国际娱乐登录组成

 

名称

96孔配置

48孔配置

备注

微孔酶标板

12孔×8条

优乐国际娱乐登录12孔×4条

标准品

0.3mL*6管

0.3mL*6管

样本稀释液

6mL

3mL

检测抗体-HRP

10mL

5mL

优乐国际娱乐登录20×洗涤缓冲液

25mL

15mL

按说明书进行稀释

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

终止液

6mL

3mL

封板膜

2张

2张

说明书

1份

1份

自封袋

1个

1个

备注:

优乐国际娱乐登录1.  标准品浓度依次为:3200、1600、800、400、200、100 pg/mL

优乐国际娱乐登录2.  经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在优乐国际娱乐登录提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。

注意事项

优乐国际娱乐登录1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

优乐国际娱乐登录2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

优乐国际娱乐登录4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

优乐国际娱乐登录6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

优乐国际娱乐登录7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏优乐国际娱乐登录中反应试剂的生物活性。

9. 不能使用过期产品。

优乐国际娱乐登录10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置。

试剂准备

优乐国际娱乐登录优乐国际娱乐登录从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

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