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elisa优乐国际娱乐登录实验中的各项操作细节

点击次数:137 发布时间:2019-04-11

细节决定成败,这对于实验室科研工作者来说也是如此。在实验中的各项操作细节有很多,如尽量少用排枪、勤换枪头,加样时由低浓度向高浓度加,因为这样可以减少跳孔的几率。而整个实验的*后关键就是结果的处理方法了,那么在在今天的技术文章中,为您带来的是ELISA优乐国际娱乐登录检测结果分析方法。

优乐国际娱乐登录①:ELISA实验中样品都要做复孔或三孔,然后计算每个浓度标准品的平均OD值,复孔的变异系数应该小于20%。

②:平均OD值减去空白孔的OD值。

③:制作标准曲线。

优乐国际娱乐登录      以减去本底后的OD值为X轴,标准品的浓度为Y轴,利用作图软件得出一个合适的计算方法。建议使用合适的软件来作图,比如CurveExpert 1.4。这款软件能够给出很多种方法(比如直线、半对数、对数、四参数方程等)并从中选择一条*合适的方程。要想检验某条曲线是否与表中数据吻合,可以将标准品的浓度作为未知数,将对应的OD值带入该方程,计算出标准品的浓度,得到的结果应该与实际浓度很接近(+/-10%)。选择拟合度的那条曲线。

       如果出现标准曲线的线性不好,或平行性不好(双孔对照孔的OD值差别很大),或出现跳孔的现象,可能引起的原因有酶标板孔间相互污染、洗板后未能尽快进行下一步操作、添加样品或其它试剂时操作的方法不对、孵育位置避光性不佳或盖板膜没有密封好使得水分蒸发、酶标板孔问加入的试剂量不同,相对应的解决办法是加样时请小心勿将液体溅人另一孔中,人工洗板时也请小心,勿将洗涤液溅人另一微孔中、在洗板后及时进行下一步操作、添加试剂时请悬空滴入,切记勿将枪头接触到板孔内,吸取不同试剂瓶中的液体时就要更换一次枪头、确认孵育环境不透光,盖板膜将酶标板密封好、使用已校正过的微量加样器,如将次加入液体时枪头上留有一滴的液体滴下,那么将以后枪头上留有的液体也滴下,以保证加入液体体积的一致性。

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